XL10-Gold Chemically Competent Cell

基因型：

TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15Tn10 (TetR) Amy CamR]

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；TetR， CamR賦予菌株四環(huán)素和LU霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。High5TM系列XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109cfu/μg。

操作說(shuō)明：

1.XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreasessharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds orfor >40 seconds.），迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。 

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

 4.XL10-Gold菌株對(duì) <40 µg/mlLU霉素有抗性，但對(duì)100 µg/mlLU霉素敏感。 

5.High5TM系列XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)2×109cfu/μg ；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)protocol。